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第一章 基因沉默概论1

第一节 基因沉默的概念、发现及分类1

第二节 基因沉默的原理及发生1

第三节 研究基因沉默的意义4

第四节 基因沉默的应用5

第五节 展望5

第二章 基于化学合成法的siRNA干扰技术6

第一节 什么是siRNA6

第二节 靶序列确定及化学合成方法8

第三节 siRNA转染细胞的方法及注意事项11

第四节 siRNA有效片段筛选意义和方法13

第五节 siRNA干扰效率检测与效果评价14

第六节 siRNA在生物医学中的应用14

第七节 问题与展望15

第三章 microRNA沉默靶基因及其应用18

第一节 microRNA的发现和基本概念18

第二节 microRNA的结构与形成18

第三节 microRNA与疾病19

第四节 microRNA与siRNA的区别20

第五节 microRNA的研究手段21

第六节 microRNA功能分析确定22

第七节 microRNA表达检测23

第八节 microRNA研究展望25

第四章 siRNA技术构建G6PD缺陷型A375稳转细胞株26

第一节 G6PD缺陷型A375稳转细胞株的构建方法26

第二节 A375-G6PD稳转细胞株的功能检测30

第三节 A375-G6PD稳转细胞株的应用30

第五章 基于PENK基因干扰克隆载体构建的RNA干扰技术30

第一节 实验原理与实验目的32

第二节 实验设备、试剂32

第三节 实验步骤34

第六章 α-突触核蛋白干扰技术42

第七章 人类免疫缺陷病毒转染皮质神经元64

第八章 单纯疱疹病毒转染原代皮质神经元和脊髓神经元71

第九章 腺病毒转染原代皮质神经元和脊髓神经元88

第十章 基因敲减理论与实验技术93

第一节 基因敲减技术发展简史93

第二节 基因敲减的概念95

第三节 基因敲减的原理95

第四节 基因敲减的应用前景97

第五节 展望97

第十一章 基因组编辑技术98

第一节 显微注射技术98

第二节 胚胎移植101

第三节 转基因动物制作104

第四节 基因打靶介导的敲除和敲入动物的制作108

第五节 转座子技术在基因修饰中的应用116

第六节 TALEN技术介导的敲除动物的制作118

第七节 CRISPR/Cas技术介导的基因敲除动物的制作120

第八节 克隆动物制作123

第十二章 调控eIF-5A1的microRNA预测与验证129

第一节 eIF-5A1靶microRNA的生物信息学预测129

第二节 eIF-5A1靶microRNA荧光素酶报告实验验证134